冷光螢光照像影像分析處理系統
Luminescence/Fluorescence
Image Acquire and Analysis System
購置單位: 醫研所 購置日期:94.5.30
保管人: 陳世杰老師 放置場所:精密儀器室
A:廠牌型號: UVP Biospecturm AC system
B:儀器介紹:
系統特點
1.本系統使用最高品質之Cooled CCD攝像機，藉由高品質真空密封、強力電冷式降溫裝置(peltier-cooled thermoelectric devices)，可有效降低雜訊值，提供最佳的解析度、靈敏度及可靠度，具備完美的攝像錄影及定量定性分析功能。
2.本系統具有極佳的解析度可應用於冷光攝像、螢光攝像、薄層層析分析及高階膠體影像分析等實驗，藉由Cooled CCD攝像錄影功能，直接擷取影像分析，可降低大量的底片費用及洗片費用。
3.本系統的影像訊號擷取時間只需30sec.，比傳統相機的曝光顯像及相片沖洗時間(5hrs)快速許多，可大幅縮短實驗時程。
4.本系統藉由搭配非放射性冷光偵測套組，可減低放射性磷使用的危險性，更可省略放射性廢棄物處理事宜。
5.可直接即時定量西方墨點Western blot、北方墨點Northern blot、南方墨點Southern blot等冷光實驗結果或薄層層析分析及高階膠體影像分析。
6. 利用專利數位影像往返飛梭功能 (Digital Video Playback,
DVPTM) ，可進行動態攝影，且將不同曝光時間的晶片積分值作數位紀錄，即時觀看影像。
7.應用
1. 冷光測定分析(Bioluminescence / Chemiluminescence Detection)
2. 螢光測定分析(Fluorescence Detection)
3. 色光測定分析(Chromogenic Image)
4. 底片影像測定分析(X-ray Film)
5. 菌落計數分析(Colony Counting)
6.
螢光薄層層析(TLC Analysis)
7. 墨點分析(Dot Blot Analysis)
8. 一維膠體影像分析(1D Gel Analysis)
9. 微陣列影像分析(Microarray Analysis)
10. 區域強度分析(Area Densitometry)
11. 影像數學計算(Image Math)
12. 分子量計算及定量(Quantitation of Molecular Weight and Mass)
C:使用規則
1. 借用人須遵守本實驗室各項安全規定。
2. 使用冷光螢光照像影像分析處理系統前，請先預約登記使用時段。
3. 預約冷光螢光照像影像分析處理系統使用時段後，請準時上機，超過預約時間15分鐘後視作棄權，並開放他人登記使用。
4. 儀器使用完後，請遵守儀器清潔步驟及保持儀器之清潔和清理操作台面，並保持門開啟，以利通風。
5. 使用者請自行準備隨身碟或光碟片前來輸出資料。 (*請確認所用隨身碟無病毒存在，方可使用於本儀器相關電腦)
6. 確實填寫使用記錄簿，若未遵守，第一次警告，第二次告知主管或指導教授，第三次停止使用。
D:操作程序
Sybr Green stain PAGE之照相
Æ 使用Visi-Blue藍光轉換板（目的將302nm UV轉成480nm）
Æ 將Visi-Blue藍光轉換板置於UV box上
( P.S：若不使用Visi-Blue藍光轉換板，可直接使用3UVTM Transilluminator的254nm。)
Procedure：
1. 開啟電腦待電腦進入Window畫面後_再將BioChemi System的電源打開
2. 點選電腦桌面捷徑”LabWorks”進入LabWork Software and AutoChemi platform _出現Experiment視窗，可記錄實驗主題、實驗者、實驗類別、日期、時間…等訊息（通常不會記錄）
3. 點選上方功能表的”Video/digital capture”，會出現“ Live Workspace Preview
(1/1) “的視窗（即BioChemi System內影像預覽畫面）、Hamamatsu
Camera的視窗(可調exposure time)。
4. 先放一張與gel大小相似的卡片(ex:名片)放在Visi-Blue藍光轉換板的正中
央(鏡頭正下方)，由暗箱外部Epi Illumination 之White鈕，開啟暗箱內white(白燈)光源，然後調整鏡頭的光圈：_ 光圈調小，可看到卡片上的字_若光圈調最小仍有過飽和現象，可將Hamamatsu
Camera視窗中的Preview Exp及Acquire Exp時間調小aZoom景深調最大a調Focus焦距到卡片上的字很清楚aZoom景深調到可看到整張卡片的大小。
5. 由暗箱外部Epi Illumination 之White鈕，關閉暗箱內white(白燈)光源。
6. 先灑一點ddH2O，舖上一層保鮮膜，將stain好的gel放於Visi-Blue藍光轉換板上(剛放卡片的位置)。
7. 由暗箱外部各項按鈕選擇適當光源與濾鏡：
j Filter：Green（515~570 nm）
k Epi Illumination：off
l Transillumination：UV
m Open Door Override：UV off
8. 當影像預覽畫面得到最佳影像後，點選Hamamatsu Camera視窗的 Stop/Capture 擷取影像_將此影像拍攝下來
9. 列印_將printer開關open_點選 File _ Print（不需按printer上的print按鍵，直接由電腦控制）
10. 存檔_在此影像畫面下_ File _ Save as _選擇欲儲存的A槽或隨身碟_更改檔名（檔案類型：TIFF檔）_ 儲存
11. 使用完後藉由暗箱外部各項按鈕關閉選擇所有光源。
Coomassie blue gel、silver stain gel及X-ray film翻拍之照相
Æ 使用隱藏式樣品置放平台內建的磷光板
Procedure：
1. 開啟電腦待電腦進入Window畫面後_再將BioChemi System的電源打開
2. 點選電腦桌面捷徑”LabWorks”進入LabWork Software and AutoChemi platform _出現Experiment視窗，可記錄實驗主題、實驗者、實驗類別、日期、時間…等訊息（通常不會記錄）
3. 點選上方功能表的”Video/digital capture”，會出現“ Live Workspace Preview
(1/1) “的視窗（即BioChemi System內影像預覽畫面）、Hamamatsu
Camera的視窗(可調exposure time)。
4. 先取下黑色平台上之平板蓋，將sample放至黑色平台之白色磷光板的正中央(鏡頭下)。
5. 調整黑色樣品置放平台的高度至適當高度(視拍攝樣品面積大小來調整)。
6. 由暗箱外部Epi Illumination 之White鈕，開啟暗箱內white(白燈)光源，然後調整鏡頭的光圈：_ Aperture光圈調小，可看到sample的band_若Aperture光圈調最小仍有過飽和現象，可將Hamamatsu Camera視窗中的Preview Exp及Acquire Exp時間調小_Zoom調至最大_調整Focus到影像為最清晰狀態之後_調整Zoom至適當大小。
7. 由暗箱外部各項按鈕選擇適當光源與濾鏡：
j Filter：
a. Coomassie blue gel：Blue (400~600nm)
b. Silver stain gel：red (570~640nm)
c. X-ray film翻拍：clear
k Epi Illumination：off
l Transillumination：white
m Open Door Override：UV off
8. 當影像預覽畫面得到最佳影像後，點選Hamamatsu Camera視窗的 Stop/Capture擷取影像_將此影像拍攝下來
9.列印_將printer開關open_點選 File _ Print（不需按printer上的print按鍵，直接由電腦控制）
10存檔_在此影像畫面下_ File _ Save as _選擇欲儲存的A槽或隨身碟_更改檔名（檔案類型：TIFF檔）_ 儲存
11 使用完後藉由暗箱外部各項按鈕關閉選擇所有光源。
冷光影像擷取，ex：Western
blot、Southern
blot…..等等
Sample：Western
blot冷光影像之擷取，ex：ECL
à使用黑色平台，黑色平台可視其所需調整高度。(ex：membrane小，但想要所擷取的影像大些，可將黑色平台升至最高點。)
Procedure：
1.
開啟電腦待電腦進入Window畫面後_再將BioChemi System的電源打開。
2.
點選電腦桌面捷徑 “LabWorks” 進入LabWork Software and
AutoChemi
platform _出現Experiment視窗，可記錄實驗主題、實驗者、實驗類別、日期、時間…等訊息。（通常不會記錄）
3.
點選上方功能表的” Video/digital capture”，會出現Live Workspace Preview (1/1) 的視窗（即BioChemi System內影像預覽畫面）、Hamamatsu
Camera的視窗(可調expose time)。
4. 先調整黑色樣品置放平台的高度至適當高度(通常調整到最高高度)。
5.
放一張與membrane約同大小的有字卡片(ex：名片)，放在保鮮膜或秤藥盤上，置於黑色平台的正中央(鏡頭下)。
6.
由暗箱外部Epi Illumination 之White鈕，開啟暗箱內white(白燈)光源，然後調整鏡頭的光圈：_ Aperture光圈調小，可看到卡片上的字為主，有過飽和現象沒關係；若Aperture光圈調最小仍有過飽和現象，可將Hamamatsu Camera視窗中的Preview Exp及Acquire Exp時間調小_Zoom調至最大_調整Focus焦距到到卡片上的字很清楚為準。(此時Focus已調整完畢。)_調整Zoom景深至適當大小。
7.
將membrane放於已舖保鮮膜或秤藥盤的上方。
Ø Zoom景深調至最適大小。
Ø Apeture調至最大。(以便擷取sample所發出的光。)
Ø 由暗箱外部Epi Illumination 之White鈕，將日光燈關掉。(此時內部呈黑暗狀態。)
Ø 由暗箱外部Filter Wheel濾鏡轉盤選擇”Clear”透明濾鏡。
8. 接著，進行擷取影像的設定：
9.
點選Hamamatsu Camera視窗中的 “Stop/Capt.” à再點選 “Option”。
10. 點選 “Dynamic
Integration”後，勾選 “Total Time Expose”，再點選 “Total
Time Setting”。
Dynamic Integration：可依實驗所需，自行設定。
Ø 在 “Total
Time” 內key in實驗所需最長曝光時間。
Ø 在 “# of
Image” 內key in在total time內，想擷取的照片數；假如更換 “# of Image”
內的設定，要在點選
“OK”
則設定才完成。
Ø 舉例：Total Time：2 minutes；# of
Image：4，表示在30”，60”， 90”， 2’ 各擷取一張影像，共4張。
11. 上述設定完後，會跳回原來的視窗，此時，把CCD的門打開，將ECL加在membrane上，關上門，點選 “Capture”，即開始擷取影像。
12. 影像擷取完畢之後，會出現DVD Toolbar，點選 “Current” or “ ►I ”，則可看每一張所擷取的影像；若點選►，則影像會如動畫般依序撥放。
13. 接著，進行存檔的設定：
14. 點選 “File”
中
“Save
As”，選擇欲儲存的資料夾(存檔類型：TIFF)，此時是將所有擷取的影像們存成一個檔案。
15. 若只想儲存一張最適當的影像，點選
“File”
中
“Open”，選擇在步驟14時所儲存的TIFF檔，出現Sequence Image Selection視窗，點選視窗中 “Load Selected Portion”。
Ø 假使只要第二張影像：
Ø 在 “Starting
Frame” 中點選 “1”。(“Starting
Frame” 中 “0” 為第一張影像。)
Ø 在 “Number
of Frames” 中點選 “1”。 (因為我們只要一張影像。)
Ø 再點選 “OK”，就會只出現第二張影像，點選 “File” 中 “Save As”，儲存檔案。
16. Printing的設定：
17. 將printer的power開啟，在電腦螢幕中的 “File”
中，點選
“Print”
列印即可。
備註：若要將所擷取的影像反白，點選 “Edit”
中的
“Display
Range” à點選Display Range 視窗中的 “Inv.”
即可。
Ø 點選Display Range 視窗中的 “Best
Fit”，可利用滑鼠箭頭拖曳來調整影像的明亮對比。